A mozgó fázis megegyezik a vér folyékony fázisával, és különféle dolgokra kell figyelni a használat során. Ezek között van néhány „csapda”, amelyekre figyelni kell.
01. Szerves oldószer hozzáadása után mérje meg a mozgófázis pH-ját
Ha a pH-t szerves adalékkal méri, a kapott pH eltér a szerves oldószer hozzáadása előtti pH-tól. A legfontosabb azonban az, hogy következetesek legyünk. Ha a pH-t mindig a szerves oldószer hozzáadása után méri, feltétlenül adja meg lépéseit az alkalmazott módszerben, hogy mások is ezt a módszert kövessék. Ez a módszer nem 100%-ban pontos, de legalább konzisztens marad a módszerrel. Ez fontosabb lehet, mint a pontos pH-érték meghatározása.
02. Nem használt puffer
A puffer célja a pH szabályozása és a változás megakadályozása. Sok más módszer megváltoztatja a mozgófázis pH-ját, ami eltolódásokat okozhat a retenciós időben, a csúcs alakjában és a csúcsválaszban.
A hangyasav, a TFA stb. nem pufferek
03. Nem használ puffert a normál pH-tartományon belül
Mindegyik puffer 2 pH-egység szélességű, amelyen belül a legjobb pH-stabilitást biztosítja. Az ezen az ablakon kívüli pufferek nem biztosítanak hatékony ellenállást a pH-változásokkal szemben. Használjon puffert a megfelelő tartományban, vagy válasszon olyan puffert, amely lefedi a szükséges pH-tartományt.
04. Adjon puffert a szerves oldathoz
A pufferoldat szerves fázissal való összekeverése nagy valószínűséggel a puffer kicsapódását okozza. Sok esetben, még ha csapadék is történt, akkor is nehéz észlelni. Ne felejtse el mindig a szerves oldatot hozzáadni a vizes fázishoz, ami nagymértékben csökkentheti a puffer kicsapódásának esélyét.
05. Keverje össze a koncentráció gradienst 0%-tól pumpával
A ma kapható szivattyúk hatékonyan keverik a mozgófázisokat és a gáztalanítást soron belül, de nem mindenkinek lesz jó minőségű szivattyúja, aki az Ön módszerét használja. Keverje össze az A-t és a B-t egyetlen oldatban, és futtassa 100%-ban inline.
Például 950 ml szerves kiindulási keveréket 50 ml vízzel összekeverve állíthatunk elő. Ennek előnye, hogy csökkentheti a HPLC-k közötti változékonyságot, és csökkentheti a buborékok és a kicsapódás lehetőségét a rendszerben. Érdemes megjegyezni, hogy a pumpás keverék aránya 95:5, ami nem jelenti azt, hogy az előkevert retenciós idő a palackban is 95:5.
06. Nem a megfelelő módosított savat (bázist) használja a puffer cseréjéhez
Csak azt a savat vagy bázist használja, amely a használt puffersót képezi. Például egy nátrium-foszfát puffert csak foszforsavval vagy nátrium-hidroxiddal kell elkészíteni.
07. Nem ad meg minden információt a pufferről a módszerben, például 5 g hozzáadásanátrium-foszfátot 1000 ml vízhez.
A puffer típusa határozza meg a pufferolható pH-tartományt. A szükséges koncentráció határozza meg a puffer erősségét. 5 gramm vízmentes nátrium-foszfát és 5 gramm mononátrium-foszfát-monohidrát puffererőssége eltérő.
08. Szerves oldószerek hozzáadása az ellenőrzés előtt
Ha az előző módszer pufferoldatot használt a B alapvonalhoz, és az Ön módszere szerves oldatot használ a B alapvonalhoz, remélhetőleg el tudja rendezni a puffert a szivattyúcsövekben és a szivattyúfejben.
09. Emelje fel az üveget, és ürítse ki az utolsó cseppet
Jó eséllyel nem lesz elég mobil fázisa a teljes futás teljesítéséhez, és a mintája füstölni fog. A szivattyúrendszer és az oszlop kiégetésének lehetősége mellett a mozgófázis teljesen elpárolog, és a palack tetején lévő mozgó fázis megváltozik.
10. Használjon ultrahangos gáztalanító mobil fázist
A legfontosabb dolog annak biztosítása, hogy az összes puffersó feloldódjon, de ez a gáztalanítás legrosszabb módja, és gyorsan felmelegíti a mozgó fázist, ami a szerves komponensek elpárolgását okozza. A későbbi felesleges problémák elkerülése érdekében szánjon öt percet a mobilfázis vákuumszűrőjére.
Feladás időpontja: 2024. augusztus 27